在BEL-7402人肝癌細胞的實驗操作中，除了常規(guī)的無菌操作和細胞培養(yǎng)規(guī)范外，還需特別注意以下幾點：

首先，細胞傳代時的消化時間需嚴格控制。該細胞系對胰酶較為敏感，過度消化會導致細胞膜損傷，影響后續(xù)貼壁和增殖。建議在顯微鏡下觀察細胞回縮變圓后立即終止消化，輕柔吹打時避免產生氣泡。若出現(xiàn)聚團現(xiàn)象，可采用400目細胞篩過濾以獲得單細胞懸液。

    其次，凍存復蘇環(huán)節(jié)要格外謹慎。凍存液中的DMSO濃度建議控制在8%-10%，程序降溫盒必須預冷至4℃后再放入-80℃冰箱。復蘇時需快速水浴震蕩至最后一塊冰晶融化，立即加入預溫的培養(yǎng)基進行梯度稀釋，以降低DMSO的滲透壓沖擊。值得注意的是，該細胞系復蘇后通常需要48小時才能恢復增殖活性，不宜在24小時內進行后續(xù)實驗。

    對于藥物敏感性實驗，要特別注意細胞接種密度的優(yōu)化。預實驗表明，BEL-7402在96孔板中的最適接種密度為5×103~8×103 cells/well，密度過高會導致對照組提前進入平臺期。建議在加藥前用無酚紅培養(yǎng)基置換原培養(yǎng)基，避免藥物與酚紅發(fā)生相互作用干擾檢測結果。MTT法測定時，甲臜結晶溶解后需在1小時內完成檢測，該細胞系產生的甲臜結晶在常規(guī)DMSO溶解后呈現(xiàn)特征性的紫紅色，若出現(xiàn)異常顏色變化應重新實驗。