產(chǎn)品名稱：腎系膜細胞*培養(yǎng)基

規(guī)格：100mL/125mL×4
貨號：YS-02X10040

細胞生長實驗 ：細胞生長良好，形態(tài)正常

儲存條件：2℃-8℃，避光儲存

運輸條件：冰袋冷藏運輸
公司產(chǎn)品僅用于科研

細胞培養(yǎng)步驟

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備RPMI-1640 培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?50px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

注意事項：

（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞最好在對數(shù)生長期，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數(shù)量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預(yù)冷。細胞離心后直接用預(yù)冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關(guān)于“慢凍"，傳統(tǒng)的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，最后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數(shù)量多的實驗室，推薦使用程序降溫盒，內(nèi)裝異丙醇，在-80度并內(nèi)可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

使用步驟：

一）準確稱量試劑：根據(jù)不同的菌類和用途，選擇適宜的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基所需試劑必須純凈。

（二）校正pH值：將稱量好的培養(yǎng)基各種成分放入容器內(nèi)，標記劃線，加熱溶解，補充水分，測定酸堿度，常用pH6.8～8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N NaOH和1N HCl調(diào)節(jié)pH值到適宜范圍內(nèi)。

（三）過濾：將玻璃漏斗置鐵架上，再用人子宮成纖維細胞*培養(yǎng)基紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中，將上述培養(yǎng)基倒入其中過濾至透明。

（四）分裝：將過濾后的培養(yǎng)基分裝于中試管或三角瓶內(nèi)（試管內(nèi)每支裝5mL；三角瓶中裝100～150ml），塞好棉塞用牛皮紙包扎好，準備滅菌。

（五）滅菌：培養(yǎng)基的滅菌，常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養(yǎng)細胞在水中煮沸后即被殺死，但細菌的芽胞有較強的抗熱性，須經(jīng)高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據(jù)蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理，即壓力越大，蒸汽溫度就越高。因此，在同一溫度條件下，采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下，菌體吸收水分后，其蛋白質(zhì)易于凝固變性，因為蒸汽的穿透力強，殺菌效果好。

細胞特性：

1)】組織來源于實驗動物的正常眼組織。

2)細胞鑒定：細胞免疫熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：上皮樣，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
Skp2/FITC 熒光素標記細胞S相激酶相關(guān)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

一氧化氮合成酶-2抗體  NOS-2/iNOS 0.1ml

5-HT/5 Hydroxy Tryptophan 英文名稱： 5羥色胺抗體 0.1ml

EME1 英文名稱： 減數(shù)分裂內(nèi)切酶EME1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-P53(Ser6) 磷酸化抑制基因P53抗體 規(guī)格 0.1ml

BDNF (Brain-derived Neurotrophin factor) 腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子(腦衍化神經(jīng)營養(yǎng)因子)(多肽片斷抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

PKB (Rat) 大鼠蛋白激酶BMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

 Phospho-EGFR(Thr669) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh MyoGEF 肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體 規(guī)格 0.2ml

Ig-j(Human immunoglubin joining chain) ELISA Kit 人球蛋白j鏈 96T

SPOP 英文名稱： SPOP蛋白抗體 0.2ml

CCKBR 英文名稱： 促胃泌素受體抗體 0.1ml

 Phospho-EGFR(Thr669) 磷酸化表皮生長因子受體抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml

Rabbit  horse IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標記的兔抗馬IgM 0.1ml

FSH receptor 英文名稱： 促卵泡刺受體抗體 0.1ml

囊性纖維化跨膜轉(zhuǎn)運調(diào)節(jié)因子抗體  CFTR 0.1ml

 OPGL/RANKL/CD254 /FITC 熒光素標記骨保護蛋白配體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PKC delta 蛋白激酶C亞性D型抗體 規(guī)格 0.2ml

Rabbit  pig IgM/HRP 辣根過氧化物酶標記兔抗豬IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
腎系膜細胞*培養(yǎng)基HA（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微升人羥基膠原吡啶交聯(lián)（OH-PYD）ELISA試劑盒, OH-PYD ELISA

FLAG（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微升人環(huán)加氧酶2（COX-2）ELISA試劑盒,COX-2 ELISA

P53（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微升人白介素1β轉(zhuǎn)換酶（ICE）ELISA試劑盒, ICE ELISA

HIS（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微升人絲/蘇蛋白磷酸酶（STK）ELISA試劑盒

ACTIN（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微升人心肌肌凝蛋白輕鏈1（CMLC-1）ELISA試劑盒,

GPDGP（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微升人分泌型球蛋白A（SIgA）ELISA試劑盒,

抗體－抗試劑專題人補體蛋白4（C4）ELISA試劑盒,

名稱規(guī)格人胸腺五肽（TP-5）ELISA試劑盒,

巨噬細胞標記MAC387抗體100微克人胰島素原（PI）ELISA試劑盒,

?平滑肌SMA抗體100微克人甲狀旁腺素（PTH）ELISA試劑盒,

APC（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克小鼠褪黑素（MT）ELISA試劑盒,

CDK2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克植物C（VC）ELISA試劑盒,

CDK3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克L-賴鹽酸鹽

CDK4（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克DL-焦谷

CDK6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克甘氨酰-脯氨酰-對對甲磺酸鹽