實驗過程：
一、利什曼原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2．產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數規格：
產品名稱：利什曼原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Leishmania spp.
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品：
非模C27H32N2O10性狀：Powder純度：98.0%    °C分子式：C22H25N3O4性狀：Powder純度：98.0%
兔抗猴IgM英文名稱: Human IgG/FITC儲存條件: -20℃分子式：C22H35NO6性狀：Powder純度：97.0%
兔抗雞IgG英文名稱: BSA/HRP儲存條件:  -20°C分子式：C22H23N3O4性狀：Powder純度：97.0%
兔抗雞IgM英文名稱: Goat anti-BSA儲存條件: -20°C分子式：C18H11NO5性狀：Brown powder純度：97.0%
兔抗馬IgG英文名稱: Rabbit Anti-mouse IgG儲存條件: -20℃分子式：C19H11NO6性狀：Orange powder純度：90.0%    3β-Isodihydrocadambine特異性: 人、大鼠、小鼠Aclenylylcyclase mRNA原位雜交試劑盒
Tyramine hydrochloride特異性: 人、大鼠、小鼠.兔Actin mRNA原位雜交試劑盒
Trolline特異性: 人ACTA2 mRNA原位雜交試劑盒
5-Carboxystrictosidine特異性: 人、大鼠、小鼠Actinin/Skeltal Muscle mRNA原位雜交試劑盒
4,5-Dihydropiperlonguminine特異性: 人、大鼠、小鼠Actinin/Smooth Muscle mRNA原位雜交試劑盒
14-O-Acetylneoline特異性: 蜜蜂ACOR1 mRNA原位雜交試劑盒
Sinomenine特異性: 人Activin A mRNA原位雜交試劑盒
兔抗牛IgG?英文名稱: Human Fibrinogen/HRP儲存條件: -20℃分子式：C34H37N3O6性狀：Powder純度：98.0%
兔抗牛IgM英文名稱: Goat anti-BSA儲存條件: -20℃分子式：C23H37NO7性狀：Powder純度：98.0%
兔抗犬IgM抗體濃度: 10mg/ml英文名稱: Rabbit anti-HRP分子式：C28H29NO7性狀：Powder純度：97.5%
兔抗人IgA英文名稱: Rabbit anti-Goat IgG儲存條件: -20°C分子式：C22H26N2O3性狀：Powder純度：98.0%
兔抗人IgG英文名稱: Chicken IgG?儲存條件: -20℃分子式：C22H26N2O4性狀：Powder純度：95.0%
兔抗人IgM英文名稱: Anti-GAPDH Monoclonal antibody宿主: Mouse 分子式：C39H44N2O7性狀：Powder純度：98.0%
兔抗生物素抗體IgG儲存條件: 4℃或-20℃凍存純度: SDS-PAGE，90%以上；抗原性，免疫電泳法90%以上；溶劑為0.01mol/L pH7.2 PBS分子式：C21H21NO5性狀：Yellow powder純度：98.0%
兔抗水貂IgG儲存條件: -20°C單位: 瓶分子式：C38H42N2O7性狀：Powder純度：97.5%
兔抗豚鼠IgG英文名稱: Rabbit anti-Human IgA儲存條件: -20°C分子式：C21H24N2O4性狀：Cryst純度：97.0%

?母。模式菌株
利什曼原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒MBP標簽小鼠單克隆抗體(9Y5),HRP偶聯　Anti-MBP Tag Mouse Monoclonal Antibody (9Y5), HRP Conjugated

MBP（MBP-Tag）標簽抗體（克隆號17D07）　Maltose Binding Protein - Tag （MBP-Tag） Antibody （Clone 17D07） （MBP-Tag）

MBD4抗體　MBD4 Antibody

MBD2a抗體　MBD2a Antibody

MBD2/3（克隆號106B691）抗體　MBD2/3 （Clone 106B691） Antibody （Methyl-CpG-Binding Domain 2/3）

MBD1抗體　MBD1 Antibody

MBD1　MBD1 polyclonal antibody （CXXC3， PCM1， RFT， Methyl-CpG-Binding Domain 1）

MBD1（克隆號100B272.1）抗體　MBD1 （Clone 100B272.1） Antibody （Methyl-CpG-Binding Domain 1）

Max結合蛋白1　MXI1 Polyclonal Antibody
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。