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產(chǎn)品名稱：輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒規(guī)格

規(guī)格 : 50管/24樣、100管/48樣

測(cè)試方法:微量法、可見分光光度法

貨號(hào)：YS-01S6334

測(cè)定意義

輔酶ⅡNADP(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NADP+和NADPH含量測(cè)定可以計(jì)算NADP（NADPH + NADP+ )含量和NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應(yīng)密切相關(guān)。NADPH/NADP+比值不僅是細(xì)胞氧化還原態(tài)的主要標(biāo)志之一，而且在PPP途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重要調(diào)控作用。

測(cè)定原理

分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NADP+和NADPH。NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用，使氧化型噻唑藍(lán)（MTT）還原為甲瓚，570nm下檢測(cè)吸光值，從而測(cè)定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原NADP+為NADPH，從而檢測(cè)NADP+含量。

所需的儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無(wú)色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過(guò)濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 。

4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來(lái)的幾萬(wàn)提高到幾十萬(wàn)。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對(duì)于一般的分光光度法來(lái)說(shuō),其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速

Anti-p53BP1/53BP1/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠p53結(jié)合蛋白1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Mouse Anti-Goat IgM/ Biotin 生物素化小鼠抗羊IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

C-藻藍(lán)素/藻藍(lán)蛋白抗體 Anti-C-PC 0.1ml

Rabbit Anti-pig IgG/Bio 生物素標(biāo)記的兔抗豬IgG 0.1ml

FARSLA/CML33 英文名稱： 慢性粒細(xì)胞白血病33抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh PI3 Kinase p110 delta 磷脂酰肌醇激酶催化亞單位D抗體 規(guī)格 0.1ml

Mouse Anti-Goat IgM/ Biotin 生物素化小鼠抗羊IgMMulti-class antibodies規(guī)格： 0.3ml

IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat 干擾素-γ多肽抗原(大、小鼠)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-CDC42 細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh OMPC 大腸桿菌外膜孔道蛋白C抗體 規(guī)格 0.1ml

CST1 Kit Human 人 Cystatin SN / CST1 ELISA配對(duì)抗體 ELISA

TTC8 英文名稱： 巴爾得-別德爾綜合征相關(guān)蛋白8抗體 0.1ml

C6orf222 英文名稱： 6號(hào)染色體開放閱讀框222抗體 0.2ml

Anti-CDC42 細(xì)胞分化周期CDC42蛋白抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

rSec6 英文名稱： 胞吐分泌蛋白Sec6抗體 0.2ml

EGFRvIII 英文名稱： 表皮生長(zhǎng)因子受體III型突變體抗體 0.1ml

血小板源性生長(zhǎng)因子-A抗體 Anti-PDGF-A 0.1ml

Anti-52KDa Ro/SSA /FITC 熒光素標(biāo)記核糖核蛋白抗原52kD-Ro/SSA抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-NEDD4L (Ser342) 磷酸化泛素連接酶NEDD4-2抗體 規(guī)格 0.1ml

FoxP3 叉頭蛋白3-T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒規(guī)格胡椒堿骨碎補(bǔ)凍切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒

胡椒堿(標(biāo)準(zhǔn)品)青黛石蠟切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒

紐莫康定B0(肺囊康定) 豬牙皂 載玻片GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

福莫特羅 紫蘇梗 凍切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

溴甲后馬托品雞血藤 石蠟切片組織GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒

乙酸阿比特龍酯鬧洋花 GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒

溴莫尼定 葛根(甘葛藤) GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒

磺草靈爵床 GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒
操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。