細胞簡介：

產品名稱 大鼠成骨細胞

組織來源 顱骨組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠成骨細胞分離自顱骨組織；顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規則骨組成。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結，起著保護和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部，內有顱腔，容納腦，共8塊。面顱為顱的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等結構，構成面部的支架，共15塊。成骨細胞是骨形成的主要功能細胞，負責骨基質的合成、分泌和礦化。骨不斷地進行著重建，骨重建過程包括破骨細胞貼附在舊骨區域，分泌酸性物質溶解礦物質，分泌蛋白酶消化骨基質，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細胞移行至被吸收部位，分泌骨基質，骨基質礦化而形成新骨；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關鍵。成骨細胞培養不僅有助于了解骨形成機制、骨骼系統疾病的分子和細胞學基礎，也是藥物篩選、生物材料開發和生物工程研究的重要手段。

方法簡介 實驗室分離的大鼠成骨細胞采用先用短時間消化、后用膠原酶反復消化制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠成骨細胞經ALP染色檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

培養信息

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養基

培養基： 大鼠成骨細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液： 0.25%

凍存步驟：

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凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

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操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。