細胞簡介：

產品名稱 大鼠神經少突膠質前體細胞

組織來源 腦組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 大鼠神經少突膠質前體細胞分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。少突膠質細胞分布于中樞神經系統，在銀浸染標本中，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。少突膠質細胞（oligodendrocyte）是中樞神經系統（CNS）的成髓鞘神經膠質細胞，其發育要經歷少突膠質細胞祖細胞、前少突膠質細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段。有學者將少突膠質細胞按其發育程度和形態分為三型。但是，細胞發育是一個連續的過程，其形態、表達產物和功能的演變沒有嚴格的界限，因此，其分類是相對的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細胞呈圓形，表面光滑，直徑約3 μm，體外混合培養時成簇生長在星形膠質表面，具有很強的分裂增殖潛力，表達GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule, PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起，極少數為單極突起，直徑約7 μm，有一定的分裂增殖能力。體外培養時為雙潛能細胞，既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質，故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell, O2A）。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產生GQ的抗體），故常用A2B5抗體標記O2A。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細胞。直徑約10 μm。根據其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞。不成熟的OL胞體常伸出4-5條較粗大突起，表面還殘留有A2B5標記物，同時也表達O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網，大量表達半乳糖腦苷脂（galactocerebro side, GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein, PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein, MBP）等，有對軸突髓鞘化的能力。體外培養的少突膠質細胞前體細胞（簡稱少突膠質細胞前體細胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質細胞，前兩者具有增殖能力。

方法簡介 實驗室分離的大鼠神經少突膠質細胞采用消化、混合細胞營養缺失培養、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的大鼠神經少突膠質前體細胞經A2B5免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑：0.25%、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）、PBS、培養基

包被條件：PLL（0.1mg/mL）

培養基：大鼠神經少突膠質前體細胞培養基(含B-27、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：雙極、多極形

傳代比例：不傳代

傳代特性：不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

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操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。