細胞簡介：

產品名稱 人表皮角化細胞

組織來源 皮膚組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人表皮角化細胞分離自皮膚組織；表皮位于動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構，由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層，即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。依據細胞的分化狀態、功能類型可以分為多種細胞類型，表皮角化上皮細胞與角質形成細胞核心細胞群體本質是同一細胞群體，前者從“表皮屬角化復層扁平上皮"的組織屬性命名，后者從“合成角蛋白、執行角化功能"的功能特征命名，二者均涵蓋表皮從基底層增殖細胞到角質層終末細胞的全分化譜系，且占表皮細胞總量超90%，是表皮屏障功能的核心載體。在這一分化譜系中，存在明確的階段差異：基底層細胞是角質形成細胞的“增殖源頭"，呈柱狀、有完整活性細胞核，以K5、K14、Ki-67、干細胞標志物p63為核心，無角化相關蛋白，未啟動角化，一般描述為角化形成細胞/角質形成細胞/角化上皮細胞等；當細胞遷移至棘層中上部至顆粒層，成為“角化細胞"——這是仍含固縮細胞核（但細胞器減少）的中間活細胞，能主動合成角蛋白與絲聚蛋白前體，處于“正在角化"的執行階段，表達切換為K1、K10為主，同時表達絲聚蛋白前體（絲聚合蛋白原，顆粒層特征）、轉酶1（TG1，促進角蛋白交聯），Ki-67陰性；終角化細胞進一步退化，在角質層形成“角質細胞"（角質層終末細胞），這是無細胞核、無細胞器的終末細胞，胞質充滿交聯角蛋白纖維，通過細胞間連接構成表皮物理屏障，無核相關標志物，以終末成熟標志物兜甲蛋白、小富脯蛋白（SPRRs）為特征，K1、K10持續存在但無活性合成功能；PCNA是增殖細胞的標志物，表皮角質形成細胞在基底層（增殖活躍區）可能表達PCNA，而終末分化層（角質層）可能不表達，細胞在不同增殖狀態表達量不一樣；這四種細胞的核心差異在于分化階段（全階段/中間態/終末態）、形態（核與細胞器有無/活性）及功能（增殖/合成/屏障），且存在“角質形成細胞（表皮角化上皮細胞）包含角化細胞與角質細胞"的邏輯關系。表皮也包含其他非角化上皮細胞：黑色素細胞（Melanocytes）、朗格漢斯細胞（Langerhanscells）、Merkel細胞等。

方法簡介 實驗室分離的人表皮角化細胞先消化、后-膠原酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人表皮角化細胞經K1免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培養基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養基： 人表皮角化細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 上皮細胞樣

傳代特性： 不增殖；不傳代

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。