細胞簡介：

產品名稱 人關節韌帶成纖維細胞

組織來源 關節韌帶

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人關節韌帶成纖維細胞分離自關節韌帶組織；韌帶是纖維結締組織，將各個骨頭在關節處連接起來，并在關節活動時加固關節穩定關節。其中顳下頜關節、踝關節、膝關節韌帶組織研究較多，顳下頜關節兩側各有三條，即顳下頜韌帶、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶。踝關節周圍韌帶根據其解剖位置可以分成3組，外側韌帶，內側三角韌帶，脛腓聯合韌帶。膝關節的韌帶有囊外韌帶和囊內韌帶，其共同作用為加強關節的穩定性。囊外韌帶主要有:髕韌帶位于髕骨的下部，關節囊的前方，是股四頭肌肌腱的延續，向下附著于脛骨粗隆，兩側有側副韌帶加強；囊內韌帶:主要為交叉韌帶。前交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起前份和股骨外側髁的內側面，防止脛骨過度前移；后交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起后份與股骨內側髁的外側面，防止脛骨過度后移。另外，在膝關節內尚有膝橫韌帶。任何關節韌帶均可由于外傷而發生損傷，但影響較大又較常見的是膝關節韌帶損傷和踝關節韌帶損傷。膝關節韌帶損傷，常見者為膝關節側副韌帶損傷。多因膝關節微屈時，突然受到內翻或外翻的沖擊力所致。踝關節韌帶損傷。多因行走或跑跳時誤入不平之處所致。以外側損傷多見。韌帶是致密纖維結締組織，主要特點是細胞、基質成分少 ，纖維非常多、纖維粗大排列緊密，且排列方向與承受張力的方向一致，有很強的保護和支持作用。韌帶主要包含韌帶成纖維細胞。人關節韌帶成纖維細胞對研究關節韌帶損傷有重要意義。

方法簡介 實驗室分離的人關節韌帶成纖維細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人關節韌帶成纖維細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養基

培養基： 人關節韌帶成纖維細胞培養基(基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖維細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3代左右

消化液：0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。