商品屬性：

產品信息：

產品名稱 人外周血T淋巴細胞

組織來源 外周血

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人外周血T淋巴細胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。外周血單個核細胞（PBMC）即外周血中具有單個核的細胞，包括淋巴細胞和單核細胞。目前，主要的分離方法是密度梯度離心法，因為血液中各有形成分的比重存在差異，因此得以分離出不同的細胞。T淋巴細胞（T-lymphocyte）來源于骨髓的多能干細胞（胚胎期則來源于卵黃囊和肝）。在人體胚胎期和初生期，骨髓中的一部分多能干細胞或前T細胞遷移到胸腺內，在胸腺激素的誘導下分化成熟，成為具有免疫活性的T細胞。成熟的T細胞經血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴區定居，并可經淋巴管、外周血和組織液等進行再循環，發揮細胞免疫及免疫調節等功能。T細胞的再循環有利于廣泛接觸進入體內的抗原物質，加強免疫應答，較長期保持免疫記憶。T細胞的細胞膜上有許多不同的標志，主要是表面抗原和表面受體。這些表面標志都是結合在細胞膜上的巨蛋白分子。多能干細胞轉變為淋巴樣前體細胞（Lymphoid precursor）遷移至胸腺，在的誘導下，經歷一系列有序的分化過程，逐漸在胸腺發育成熟為識別各種抗原的T細胞庫。T淋巴細胞進入胸腺后首先經歷兩個階段：①早期T淋巴細胞發育階段，即始祖CIM和CD8雙陰性T淋巴細胞（double negative cell, DN）分化為CD4和CD8雙陽性T細胞（double positive cell, DP）；②DP細胞分別經歷陽性選擇階段和陰性選擇階段獲取MHC限制性識別能力和對自身抗原的耐受性，發育為其表面標志為CD4或CD8的單陽性T細胞（single positive cell，SP），遷往周圍淋巴器官定居。T細胞是相當復雜的不均一體、又不斷在體內更新、在同一時間可以存在不同發育階段或功能的亞群，但分類原則和命名比較混亂，尚未統一。按免疫應答中的功能不同，可將T細胞分成若干亞群，一致的有：1、輔助性T細胞（Helper T cells, Th），具有協助體液免疫和細胞免疫的功能；2、抑制性T細胞（Suppressor T cells, Ts），具有抑制細胞免疫及體液免疫的功能；3、效應T細胞（Effector T cells, Te），具有釋放淋巴因子的功能；4、細胞毒性T細胞（Cytotoxic T cells, Tc），具有殺傷靶細胞的功能；5、遲發性反應T細胞（Delayed type hypersensitivity T cells, Td），有參與Ⅳ型反應的作用；放大T細胞（Ta），可作用于Th和Ts，有擴大免疫效果的作用；6、原始的或天然T細胞（Virgin or Natural T cells），他們和抗原接觸后分化成效應T細胞和記憶T細胞；7、記憶T細胞（Memory T cell, Tm），有記憶特異性抗原刺激的作用。T細胞在體內存活的時間可數月至數年。其記憶細胞存活的時間則更長。其中，Th細胞又被稱為CD4+細胞，因為其在表面表達CD4（cluster of differentiation 4）。通過與MHCⅡ（主要組織相容性復合體，major histocompatibility complex）遞呈的多肽抗原反應被激活。MHCⅡ在抗原遞呈細胞（antigen presenting cells,APCs）表面表達。一旦激活，可以分泌細胞因子，調節或者協助免疫反應。Tc細胞又名為CD8+細胞，其表面表達CD8。這類細胞可以通過MHCI與抗原直接結合。淋巴細胞主要包括T淋巴細胞（CD3+），B淋巴細胞（CD19+），NK細胞（CD16+CD56+）。

方法簡介 實驗室分離的人外周血T淋巴細胞采用取外周血、通過密度梯度離心法結合磁珠分選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人外周血T淋巴細胞經CD3免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基： 人外周血T淋巴細胞培養基(基礎培養基，含IL-2、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 懸浮

細胞形態： 圓形

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 不建議傳代

人外周血T淋巴細胞體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

原代細胞培養步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO?培養，24小時后換液?。

培養方法?：

原代細胞培養?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養皿。

37℃、5% CO?培養，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養。

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