細胞簡介：

產(chǎn)品名稱 兔鼻黏膜上皮細胞

組織來源 鼻黏膜組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 兔鼻黏膜上皮細胞分離自鼻黏膜組織；黏膜是覆蓋在機體內(nèi)消化、呼吸、泌尿、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結(jié)構(gòu)，由上皮組織和疏松結(jié)締組織構(gòu)成。根據(jù)部位不同，有口腔黏膜、胃腸黏膜、鼻腔黏膜、氣管黏膜、陰道黏膜、眼瞼黏膜等不同名稱。它們的結(jié)構(gòu)也因功能、部位不一而不盡相同。鼻腔黏膜，簡稱鼻黏膜，覆蓋于鼻腔表面，黏膜下方為軟骨、骨或骨骼肌。根據(jù)結(jié)構(gòu)與功能的不同，鼻黏膜又分為前庭部、呼吸部和嗅部三部分。前庭部是鄰近外鼻孔的部分，有豐富的鼻毛可以阻擋空氣中較大的塵粒吸入。呼吸部占鼻黏膜的大部，有發(fā)達的上皮纖毛，它們可向咽部擺動，黏著有塵粒、細菌的黏液排向咽部，終將它們排出體外。此外，此部分有豐富的血管與腺體，對吸入的空氣有加溫和濕潤作用。嗅部黏膜范圍較小，主要位于鼻腔頂部。它含有一種專司嗅覺的嗅細胞及嗅腺，它們分泌能溶解到達嗅區(qū)的含氣味的微粒，刺激嗅細胞表面上的嗅毛產(chǎn)生嗅覺，而且還由于嗅細胞具有不同的受體，可分別接受不同化學(xué)分子的刺激，因此可產(chǎn)生不同的嗅覺。

方法簡介 實驗室分離的兔鼻黏膜上皮細胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實驗室分離的兔鼻黏膜上皮細胞經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）[PB180635]或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL） 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）

培養(yǎng)基： 兔鼻黏膜上皮細胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、EGF、Hydrocortisone、腎上腺素、甲狀腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 上皮細胞樣

傳代比例： 1???

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數(shù)生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養(yǎng)?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細胞電特性（如鈉電流）。