細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞

簡稱 BMEC;BMVEC

組織來源 腦組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自腦組織；腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細(xì)胞，能夠限制可溶性物質(zhì)和細(xì)胞等從血液進(jìn)入大腦，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞與外周內(nèi)皮細(xì)胞相比具有些相同特性。它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質(zhì)對持血管張力、調(diào)節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管疾病的發(fā)病機(jī)制中有重要病理生理學(xué)意義。與外周內(nèi)皮細(xì)胞相同，大腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞表面表達(dá)細(xì)胞粘附分子，調(diào)控白細(xì)胞進(jìn)入大腦。由于微血管內(nèi)皮細(xì)胞的器官特異性，內(nèi)皮細(xì)胞通常取源于疾病研究的相關(guān)組織。其主要特征如下：①腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞存在許多細(xì)胞間緊密連接，產(chǎn)生很高的跨內(nèi)皮阻抗，延遲細(xì)胞旁的通量；②腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺乏內(nèi)皮細(xì)胞的窗孔結(jié)構(gòu)，其液相物質(zhì)胞飲水平較低；③腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞具有不對稱定位酶和載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)，從而產(chǎn)生“兩極分化"的表現(xiàn)型。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用膠原酶-混合消化法結(jié)合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、多聚-L-賴溶液（1×）或多聚-L-賴溶液（10×）或明膠包被液（1 mg/mL） 、PBS 、培養(yǎng)基

包被條件： PLL（0.1 mg/mL）或明膠（0.1%）

培養(yǎng)基： 兔腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳1-2代；不建議多次傳代

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。