細胞簡介：

產品名稱 兔胚胎肢芽間充質干細胞

組織來源 胚胎

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 兔胚胎肢芽間充質干細胞分離自胚胎肢芽；胚胎肢芽存在于兩棲類以上的大多數脊椎動物胚胎中，在四肢發生的初期階段，在身體兩側有呈芽狀的突起，內部是中胚層側板的體壁板垱厚形成，表面有表皮覆蓋。在這個中胚層區肢芽迅速伸長，不久，在其前端即見有指的突起。在此時期間，其內部的中胚層分化成軟骨、肌肉等。這些分化組織，在將肢芽作分離培養的時候也可以獲得。根據對兩棲類的有尾類的研究，作為肢原基各部的胚發能力，肢芽物質的大部分是位于背半部，而前半部主要參與基部形成，后半部參與前端的形成。在實驗上，即使將肢的原基分成二半，每半調整好都可形成基本上近于正常形態的肢體，而且肢體各軸的極性和側性也逐漸決定。間充質干細胞（MSC）是屬于中胚層的類多能干細胞，主要存在于結締組織和器官間質中，是具有高度自我更新和多向分化潛能的干細胞；這些細胞可以通過分裂持自身細胞的特性和數量，并在特定條件下轉變成為種或多種構成機體組織或器官的細胞，從而在組織修復等方面發揮積極作用。

方法簡介 實驗室分離的兔胚胎肢芽間充質干細胞采用-膠原酶聯合消化法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的兔胚胎肢芽間充質干細胞經CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 兔胚胎肢芽間充質干細胞培養基(基礎培養基，含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3-5代左右

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。