細胞簡介：

產品名稱 兔心肌成纖細胞

組織來源 心臟組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 兔心肌成纖細胞分離自心臟組織；心臟由心肌細胞和非心肌細胞組成，非心肌細胞占細胞總數量的約70%，其中約90%以上的非心肌細胞由心肌成纖細胞組成，在不同物種（如小鼠、大鼠和人類）中可能略有差異。“成纖細胞" 指類存在于間質中的異質性高遷移基質細胞，其功能和表型具有組織特異性。在心臟中，心臟成纖細胞負責持組織穩態并調控細胞外基質（ECM）的更新。目前尚無特異性的心臟成纖細胞分子標志物，但這類細胞通常表達轉錄因子 21（TCF21）、波形蛋白（vimentin）及 CD90（或 Thy-1）。心肌成纖細胞在生物學特性上與肝星狀細胞存在顯著共性，二者均以“靜息-激活"的功能狀態轉換為核心特征，且狀態轉換緊密關聯細胞的增殖活性與功能實現。當受到應激或損傷時，成纖細胞會失去正常表型并活化成為肌成纖細胞。靜息心肌成纖細胞的細胞骨架中不含 α- 平滑肌肌動蛋白（α-SMA）。與靜息成纖細胞不同，肌成纖細胞收縮能力強，其細胞骨架排列特殊，含有α-SMA陽性應力纖 、成熟黏著斑，并會增加骨膜蛋白（periostin）和纖狀膠原蛋白的合成。有研究表明，在模擬天然組織特性的彈性表面培養原代成纖細胞有助于減輕肌成纖細胞的活化。對于心肌組織而言，彈性模量（E）約為7 kPa的培養表面模擬健康組織，而E>10 kPa的表面則被視為纖化組織。這構成了個顯著挑戰，因為傳統聚苯乙烯組織培養板的硬度要高得多，通常可達E=3 GPa。此外，雖然傳代原代細胞以提高培養群體均性是常規操作，但傳代會進步驅動肌成纖細胞活化。原代心肌成纖細胞在傳統細胞培養中接種數小時內就會自發呈現促纖化的活化肌成纖細胞表型。有研究表明，在低營養、低血清、細胞接種在低生物力學刺激的彈性基質（而非堅硬塑料）上，可使未傳代（P0）原代心肌成纖細胞在體外持超過72小時，且不會顯著活化肌成纖細胞表型，但其持效果仍然有限。實驗室分離的心肌成纖細胞，經實驗測試，剛分離后即立刻接種在培養板/爬片，培養24 h約70-90%占比細胞表達Vimentin處于靜息態（其他處于激活態），培養48 h約>70%轉變為激活態，α-SMA表達上升。傳代操作后大部分處于激活態。該細胞鑒定為接種24 h內靜息態時刻鑒定（Vimentin/α-SMA），細胞經培養、運輸后已處于激活態。

方法簡介 實驗室分離的兔心肌成纖細胞采用膠原酶-聯合消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的兔心肌成纖細胞經Vimentin/α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

產品信息：

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 兔心肌成纖細胞 培養基(基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準備?

確保細胞處于對數生長期，密度達80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎培養基+40%FBS+10%DMSO?。

?細胞處理?

棄去培養上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細胞數100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時，-80℃過夜后轉入液氮?。

公司正在出售的產品：

操作實驗步驟：

1. 原代細胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續梯度離心，收集組織細胞密集帶?。

?細胞培養?：將細胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細胞生長因子2（FGF-2）的培養基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養?。

2. 細胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質細胞，280r/min收集少突前體細胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標志物表達，確認細胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術檢測細胞電特性（如鈉電流）。