商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱(chēng) 小鼠卵巢成纖細(xì)胞

組織來(lái)源 卵巢組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 小鼠卵巢成纖細(xì)胞分離自卵巢組織；卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類(lèi)固醇。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢，但是部分魚(yú)類(lèi)的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu)，而所有鳥(niǎo)類(lèi)只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的對(duì)卵圓形的生殖器官，它的外表有層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周?chē)糠郑饕陕雅莺徒Y(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。成纖細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)；成纖細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的卵巢成纖細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30 min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6 h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖細(xì)胞大多分布于卵巢表面，其主要特點(diǎn)和功能：①成纖細(xì)胞在體外易于培養(yǎng)；②卵巢損傷后，成纖細(xì)胞能修復(fù)和重塑卵巢；③能在卵巢炎癥時(shí)有效控制炎癥擴(kuò)散。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵巢成纖細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵巢成纖細(xì)胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 小鼠卵巢成纖細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3代左右

消化液： 0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無(wú)菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過(guò)濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過(guò)濾。

通過(guò)IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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