細(xì)胞簡介：

產(chǎn)品名稱 小鼠尿道平滑肌細(xì)胞

組織來源 尿道組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡介 小鼠尿道平滑肌細(xì)胞分離自尿道管組織；尿道是從膀胱通向體外的管道。起自膀胱的尿道內(nèi)口，止于尿道外口，行程中通過前列腺部、膜部和陰莖海綿體部，尿道在尿道膜部有環(huán)橫行紋肌構(gòu)成的括約肌，稱為尿道外括約肌，由意識(shí)控制。尿道有三個(gè)解剖上的較狹部和膨大部，前者分別位于外口、膜部和內(nèi)口，后者位于舟狀窩、球部和前列腺部。尿道壁為粘膜層、粘膜下層和肌肉層所組成。在前尿道的外面，還包有豐富的彈力纖和平滑肌纖的尿道海綿體。尿道粘膜上皮在前列腺部為移行上皮（近膀胱部），部分為多列或復(fù)層柱狀上皮，在有尿道海綿體的部分尿道，主要為復(fù)層柱狀上皮，在皺襞上也有單層柱狀上皮。特別在舟狀窩內(nèi)有許多環(huán)狀細(xì)胞，舟狀窩的遠(yuǎn)端部開始有未角化的復(fù)層鱗狀上皮。粘膜下層血液豐富，主要為結(jié)締組織。肌肉層有縱行肌和外環(huán)形肌。

方法簡介 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠尿道平滑肌細(xì)胞采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過平滑肌細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠尿道平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 小鼠尿道平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳2-3代左右

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對數(shù)生長期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過膜片鉗技術(shù)檢測細(xì)胞電特性（如鈉電流）。