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原代細胞培養實驗器具清洗步驟

原代細胞實驗器具清洗l玻璃類1、主要有：培養瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，離心管，試管，培養皿等。2、清洗步驟：泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具，自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃，25min)→烘干→使用。注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同。l塑料類1塑料類器具主要包括：孔板，大槍頭...

影響哺乳動物細胞復蘇的因素

影響哺乳動物原代細胞復蘇的因素包括：（a）細胞類型，（b）生長階段，（c）細胞處于細胞周期的哪個階段，（d）終懸液中的細胞數量和濃度。可通過優化以上因素來提高復蘇細胞活力，另外，還需考慮凍存保護劑的特性以及凍存過程的具體操作。哺乳動物細胞培養對其他細胞和微生物的污染特別敏感，例如Hela細胞。由于這種特性，初始細胞系可通過同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析，檢測來源。凍存前后均應該進行如上檢測。特別需要注意的是，病毒和支原體污染。一套完整健全的哺乳動物細胞系鑒定...

神經細胞分散培養

（一）細胞系選材常用胚胎動物或新生鼠神經組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過也有認為與組織相關。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質聯合培養的大鼠胚，則黑質以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細胞成活率高，顆粒細胞正在分化；脊髓與DRG聯合培養，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經成活率高。（二）取材。腦則取出相應組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消...

巨核細胞基本生理功能分析

巨核細胞株雖然在骨髓的造血細胞中為數zui少，僅占骨髓有核細胞總數的0.05%，但其產生的血小板卻對機體的止血功能極為重要。每個巨核細胞均可產生1000-6000個血小板。生成血小板的巨核細胞也是從骨髓中的造血干細胞分化發展來的。造血干細胞首先分化生成巨核系祖細胞，也稱巨核系集落形成單位(colonyformingunit-megakaryocyte,CFU-Meg)。祖細胞階段的細胞核內的染色體一般是2-3倍體。當祖細胞是2倍體或4倍體時，細胞具有增殖能力，因此這是巨核細胞...

原代細胞核的分離提取

(一)原代細胞操作步驟1．用頸椎脫位的方法處死小白鼠后，迅速剖開腹部取出肝臟，剪成小塊(去除結締組織)盡快置于盛有0.9％NaCl的燒杯中，反復洗滌，盡量除去血污，用濾紙吸去表面的液體。2．將濕重約1g的肝組織放在小平皿中，用量筒量取8ml預冷的0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液，先加少量該溶液于平皿中，盡量剪碎肝組織后，再全部加入。3．剪碎的肝組織倒入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，左手持之，右手將勻漿搗桿垂直插入管中，上下轉動研磨3～5次，...

程序降溫盒提高細胞凍存的存活率的方法

1.細胞系實驗室凍存盒平時放4度，需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮，貴重的細胞盡快轉移，不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的，很方便，效果也不錯的。2.異丙醇的量是要保證的，不能低于表明的線，否則不能起到很好的程序性降溫作用，我們是在4度放置，放了細胞后立馬放到-80度冰箱，第二天再轉移到液氮，效果很不錯。異丙醇熔點：-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性：口服...

原代細胞培養玻璃器皿的清洗

①原代細胞浸泡：新購進的玻璃器皿常帶有灰塵，呈弱堿性，或帶有鉛、碑等有害物質，故先用自來水浸泡、水洗，然后再用2%~5%鹽酸浸泡或煮沸30min，水洗。要領：培養用后的玻璃器皿要立即泡入清水中，使下道刷洗工作能順利進行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質附著，干涸后不易刷洗掉，用后要立即用清水浸泡。②刷洗：用軟毛刷、洗滌劑，刷去器皿上的雜質，沖洗晾干。要領：浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質、刷洗次太多，會損害器皿的表面光潔度，洗滌劑有使pH上升的趨勢，所以易選用軟毛...

原代細胞線粒體膜勢能的檢測

原代細胞線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用，多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡，而線粒體跨膜電位的下降，被認為是細胞凋亡級聯反應過程中zui早發生的事件，它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前，一旦線粒體DYmt崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。線粒體跨膜電位的存在，使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、3，3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbe...