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哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)錄調(diào)控原理分析

細(xì)胞系RNA聚合酶II是三大RNA聚合酶之一，存在于基因轉(zhuǎn)錄裝置的核心位置，編碼蛋白質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄受到RNA聚合酶的調(diào)控。RNA聚合酶解開DNA雙鏈，沿著一條鏈移動(dòng)。在移動(dòng)過程中，它們一邊“解讀”DNA鏈上的核苷，一邊合成一條相應(yīng)的RNA鏈。由PolII合成的RNA就是mRNA，它們將合成蛋白質(zhì)的指令傳給核糖體。過往的研究證實(shí)，在許多哺乳動(dòng)物的多個(gè)基因進(jìn)行轉(zhuǎn)錄時(shí)，RNAPII往往會(huì)在啟動(dòng)子附近的某些特定區(qū)域發(fā)生停頓。這種停頓往往是發(fā)生在RNAPII復(fù)合體形成和轉(zhuǎn)錄起始之后。而這...

過氧化物酶標(biāo)記測(cè)定法原理

腫瘤細(xì)胞原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細(xì)胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報(bào)告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結(jié)合.在適合底物存在下,過氧化物酶可產(chǎn)生很強(qiáng)的顏色反應(yīng),特異準(zhǔn)確的定位出正在凋亡的細(xì)胞,因而可在普通光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察.毛地黃植物是地高辛的*來源.在所有動(dòng)物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結(jié)合的配體,因而非特異性反應(yīng)很低.抗地高辛的特異性...

新生小鼠頸上交感神經(jīng)元分散細(xì)胞培養(yǎng)

原代細(xì)胞交感神經(jīng)系統(tǒng)在維持機(jī)體的正常功能和對(duì)環(huán)境的適應(yīng)性反應(yīng)中起著十分重要的作用。交感神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)特別有助于神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育和可塑性研究，利用體外培養(yǎng)系統(tǒng)可進(jìn)行交感神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)生、死亡、形態(tài)和生化發(fā)育、遞質(zhì)表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養(yǎng)系統(tǒng)可獲得關(guān)于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、激素，細(xì)胞因子等調(diào)節(jié)交感神經(jīng)元發(fā)育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機(jī)制。1、材料和方法實(shí)驗(yàn)用出生當(dāng)天的昆明種小鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯...

常見的細(xì)胞因子受體檢測(cè)的方法介紹

（一）活細(xì)胞系吸收試驗(yàn)原理將過量的待測(cè)細(xì)胞與*細(xì)胞因子共孵育，若細(xì)胞膜表面存在相應(yīng)的細(xì)胞因子受體即可結(jié)合細(xì)胞因子，通過測(cè)定前、后細(xì)胞因子生物活性的對(duì)比情況可推測(cè)待測(cè)細(xì)胞表面細(xì)胞因子受體是否存在。方法1．過量的待測(cè)細(xì)胞、適量細(xì)胞因子準(zhǔn)備。2．共孵育，時(shí)間根據(jù)待測(cè)細(xì)胞和細(xì)胞因子選擇。可設(shè)2h,4h,6h,8h和更長(zhǎng)時(shí)間。3．離心（1500r/min,5分鐘）收集上清液。4．測(cè)定孵育前后的細(xì)胞因子活性。方法同細(xì)胞因子測(cè)定。注意事項(xiàng)此法簡(jiǎn)便，適用于定性，但不適用于定量檢測(cè)。（二）核素...

原代細(xì)胞計(jì)數(shù)的操作步驟

（一）原代細(xì)胞計(jì)數(shù)1、將血球計(jì)數(shù)板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。2、將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計(jì)數(shù)板之間。3、靜置3分鐘。4、鏡下觀察，計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按下式計(jì)算：細(xì)胞數(shù)/ml＝4大格細(xì)胞總數(shù)/4×10000注意：鏡下偶見由兩個(gè)以上細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，應(yīng)按單個(gè)細(xì)胞計(jì)算，若細(xì)胞團(tuán)占10%以上，說明分散不好，需重新制備細(xì)胞懸液。（二）原代細(xì)胞活力1、將細(xì)胞懸液以0.5ml加入試管中。2、加入0.5ml0.4...

從原培養(yǎng)容器中分離細(xì)胞操作流程

細(xì)胞系從基層迅速分離細(xì)胞，且保持細(xì)胞完整性的一般步驟。這一步驟并不意味著對(duì)于所有細(xì)胞系的廣泛應(yīng)用，每一種系統(tǒng)*條件和施用濃度應(yīng)該根據(jù)經(jīng)驗(yàn)加以確定。再次培養(yǎng)時(shí)檢測(cè)細(xì)胞的活性。細(xì)胞的活率應(yīng)該超過90%對(duì)于無血清培養(yǎng)基，降低胰蛋白酶使用量。1.移棄使用過的細(xì)胞培養(yǎng)基。2.使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗細(xì)胞系(看表確定正確的清洗溶液)。在培養(yǎng)瓶對(duì)著細(xì)胞的一面加入清洗溶液，通過轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶1到2分...

成纖維細(xì)胞排除法操作流程

1.原代細(xì)胞機(jī)械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭(用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲)、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用(也可用特制電熱燒灼器刮除)。刮除程序?yàn)椋?1)標(biāo)記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養(yǎng)瓶皿的背面圈下生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的部位;(2)刮除：棄掉培養(yǎng)液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標(biāo)記空間;(3)用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細(xì)胞;(4)注入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)仍有成纖維細(xì)胞殘留，可重復(fù)刮除至*除掉為止2.反復(fù)貼壁法：根據(jù)腫瘤細(xì)胞比...

對(duì)淋巴細(xì)胞系進(jìn)行體外刺激預(yù)孵育、或板內(nèi)同步刺激培養(yǎng)

1、將抗原和淋巴細(xì)胞系在體外混合，刺激并預(yù)孵育，是通用的方法。預(yù)孵育的淋巴細(xì)胞，在置入ELISPOT板之前應(yīng)使用復(fù)溫到37℃的培養(yǎng)液清洗細(xì)胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培養(yǎng)5～6小時(shí)。2、對(duì)于高度特異性抗原，可以采用將淋巴細(xì)胞和抗原同時(shí)加入ELISPOT板孔中，37℃培養(yǎng)箱中，同步進(jìn)行刺激、培養(yǎng)、和細(xì)胞因子捕獲。淋巴細(xì)胞板內(nèi)同步刺激培養(yǎng)的時(shí)間通常為22～24小時(shí)。3、ELISPOT試驗(yàn)檢測(cè)的是每一個(gè)分泌細(xì)胞系因子的活化細(xì)胞。在培養(yǎng)細(xì)胞過程中，任何移動(dòng)、震動(dòng)（...